上海分光光度計(jì)作為一種基于物質(zhì)對光吸收原理的分析儀器，是現(xiàn)代分析與質(zhì)量控制的基石。無論是在科研實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行精密的定量分析，還是在工業(yè)現(xiàn)場執(zhí)行快速的質(zhì)量檢測，其核心操作邏輯相通。本指南將為您梳理一套通用且規(guī)范的操作流程。
一、操作核心原理
在開始操作前，請理解其基本工作原理：一束特定波長的光穿過待測樣品溶液，樣品中的待測物質(zhì)會選擇性地吸收一部分光能。儀器通過檢測透射光的強(qiáng)度，并與穿過參比溶液的光強(qiáng)進(jìn)行比較，最終根據(jù)朗伯-比爾定律計(jì)算出樣品的吸光度，進(jìn)而確定待測物質(zhì)的濃度。
核心公式：A=εbc
其中，A為吸光度；ε為摩爾吸光系數(shù)；b為光程（比色皿厚度）；c為濃度。
二、通用操作流程
第一步：開機(jī)預(yù)熱與初始化
1.連接電源：確保儀器放置在平穩(wěn)、無振動、遠(yuǎn)離強(qiáng)磁場干擾的臺面上，連接電源。
2.開機(jī)：打開儀器電源開關(guān)?，F(xiàn)代分光光度計(jì)通常會進(jìn)行自檢，包括光源、檢測器和光柵的初始化。請耐心等待自檢完成。
3.預(yù)熱：這是保證數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性的關(guān)鍵步驟。通常需要預(yù)熱15-30分鐘，以使光源強(qiáng)度穩(wěn)定。具體預(yù)熱時(shí)間請參考具體型號的說明書。
第二步：準(zhǔn)備樣品與參比溶液
1.參比溶液：通常使用溶解樣品的溶劑（如超純水、緩沖液等）作為參比。它的作用是消除溶劑和比色皿本身對光的吸收和反射帶來的影響，將儀器“歸零”。
2.待測樣品：將待測物質(zhì)溶解在合適的溶劑中，并確保溶液澄清、無懸浮物。對于未知濃度的樣品，需將其稀釋至儀器的線性檢測范圍內(nèi)。
第三步：設(shè)置測量參數(shù)
通過儀器面板或連接的電腦軟件進(jìn)行設(shè)置：
1.選擇測量模式：
吸光度：常用模式，用于直接讀取吸光度值，進(jìn)行定量分析。
透光率：測量光透過樣品的能力百分比。
濃度：在建立標(biāo)準(zhǔn)曲線后，可直接讀取濃度值。
2.設(shè)定波長：根據(jù)待測物質(zhì)的最大吸收波長（λmax）設(shè)定測量波長。如未知，可先進(jìn)行波長掃描。
3.其他參數(shù)：根據(jù)需要設(shè)置掃描范圍、帶寬、響應(yīng)時(shí)間等。工業(yè)場景中，這些參數(shù)通常已預(yù)設(shè)并鎖定。
第四步：校準(zhǔn)與調(diào)零
1.清潔比色皿：
使用專用于光譜分析的比色皿（玻璃或石英）。
手持比色皿的毛面，用擦鏡紙輕輕擦拭透光面，確保其潔凈、無指紋、無水漬。
2.加入溶液：
將參比溶液倒入比色皿中，液面高度約為比色皿的3/4。避免產(chǎn)生氣泡，如有氣泡可輕彈比色皿壁使其逸出。
同樣方法將待測樣品倒入另一個(gè)匹配的比色皿中。
3.調(diào)零：
將裝有參比溶液的比色皿放入樣品室，并確保其透光面對準(zhǔn)光路（通常有標(biāo)記）。
蓋上樣品室蓋子，按下儀器上的“AutoZero”或“Blank”鍵。儀器會將該狀態(tài)定義為吸光度零點(diǎn)或透光率100%。
第五步：樣品測量
1.取出參比比色皿，放入裝有待測樣品的比色皿。
2.蓋上樣品室蓋子，儀器會自動或等待用戶指令后顯示測量結(jié)果（吸光度或濃度）。
3.記錄數(shù)據(jù)。若需測量多個(gè)樣品，重復(fù)此步驟。每測量一個(gè)樣品或每隔幾個(gè)樣品，建議用參比溶液重新檢查零點(diǎn)，以確保數(shù)據(jù)穩(wěn)定。
第六步：關(guān)機(jī)與整理
1.測量結(jié)束后，取出比色皿，將溶液倒出。
2.立即用蒸餾水或指定溶劑清洗比色皿，最后可用純水沖洗并倒置晾干。
3.關(guān)閉儀器電源，斷開電源連接。
4.清理臺面，做好使用記錄。
三、實(shí)驗(yàn)室與工業(yè)場景的側(cè)重點(diǎn)
實(shí)驗(yàn)室場景：
更注重精確度與靈活性：操作者常需自行摸索最佳波長、建立精細(xì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線、研究反應(yīng)動力學(xué)等。
樣品前處理復(fù)雜：可能涉及復(fù)雜的稀釋、衍生化等步驟。
數(shù)據(jù)處理深入：需進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線、計(jì)算回收率等。
工業(yè)場景：
追求效率與標(biāo)準(zhǔn)化：方法通常已固化，操作流程高度標(biāo)準(zhǔn)化，甚至使用專用的“方法包”。
自動化程度高：常配備自動進(jìn)樣器，操作簡化，一鍵啟動。
注重重復(fù)性與合規(guī)性：強(qiáng)調(diào)嚴(yán)格按照SOP操作，數(shù)據(jù)直接輸出至LIMS系統(tǒng)，并符合GMP/ISO等質(zhì)量管理體系要求。
儀器更堅(jiān)固耐用：可能需適應(yīng)車間環(huán)境。
四、注意事項(xiàng)
1.比色皿匹配性：用于參比和樣品的比色皿必須光學(xué)性能一致。
2.溶液濃度：確保樣品吸光度在儀器線性范圍內(nèi)（通常為0.2-0.8A），過高需稀釋。
3.防止污染：移液器、比色皿、試劑均需保持潔凈，避免交叉污染。
4.安全第一：處理有毒或腐蝕性樣品時(shí)，務(wù)必佩戴個(gè)人防護(hù)裝備，并按照規(guī)定處理廢液。
遵循本指南，您將能安全、規(guī)范地操作分光光度計(jì)，無論是在追求精準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室，還是在要求高效穩(wěn)定的工業(yè)現(xiàn)場，都能獲得可靠的分析結(jié)果。
